C18柱是一种常用的反相色谱柱,,,,,,,它以十八烷基硅烷键合硅胶为填料,,,,,,,因此有较高的碳含量和更好的疏水性,,,,,,,对种种类型的生物大分子有更强的顺应能力,,,,,,,适用规模较广,,,,,,,是液相色谱仪剖析中的色谱柱类型。。。。。
C18液相色谱柱使用注重事项:
1、新C18色谱柱在使用前,,,,,,,须先用甲醇或乙腈试剂以20倍柱体积低流速冲洗,,,,,,,作用是使牢靠相能充分润湿、碳链舒展*,,,,,,,使色谱柱的性能抵达状态。。。。。详细操作是,,,,,,,将配制好65%的乙腈/水冲洗后,,,,,,,把色谱柱入口端毗连在色谱仪上,,,,,,,出口端放空(不可连上检测器,,,,,,,以免污染了检测器),,,,,,,以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速将色谱柱中的清稀溶液吹干,,,,,,,过20分钟后再接上检测器,,,,,,,以1.0ml/min的流速,,,,,,,继续冲洗2~8小时;;;;;;;;
2、液相色谱仪检测剖析样品完毕后,,,,,,,须冲洗色谱柱。。。。。尤其是流动相中含有酸或盐时,,,,,,,需将色谱柱中的酸或盐冲洗清洁,,,,,,,通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积;;;;;;;;
3、若色谱柱处于恒久闲置状态时,,,,,,,要将色谱柱*冲洗,,,,,,,建议冲洗3-4小时以上,,,,,,,zui后生涯在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液(如90%甲醇水)中;;;;;;;;
4、由于C18柱的牢靠相疏水性较强,,,,,,,在使用历程中只管不要使用高水相条件,,,,,,,若水相比例过高易引起牢靠相疏水塌陷,,,,,,,引起柱效迅速下降,,,,,,,甚至造成不可逆的负面影响;;;;;;;;由于碳载量高,,,,,,,体现尤为显着,,,,,,,建议使用历程中水相比例不凌驾90%;;;;;;;;
5、色谱柱压力升高、柱性能下降:通常为色谱柱被污染,,,,,,,对色谱柱举行再生处置惩罚可恢复部分柱效;;;;;;;;
6、色谱柱压力骤升:通常由盐析出或筛板梗塞引起,,,,,,,若是盐析出,,,,,,,用10%甲醇水低流速冲 洗至压力恢复即可;;;;;;;;若判断并非盐析出,,,,,,,以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱(将色谱柱反接,,,,,,,不接检测器),,,,,,,若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效,,,,,,,需寻找其他缘故原由。。。。。