C18反相色谱柱是一种高效液相色谱柱，，，，，，在药物剖析、情形监测、食物清静检测等领域有着普遍的应用。。。。。。。使用反相色谱手艺，，，，，，其原理是外貌修饰成疏水性的碳链（C18链）与待测物通过疏水作用相互作用，，，，，，实现看待测物的疏散和纯化。。。。。。。详细来说，，，，，，C18反相色谱柱内部填充有一定巨细和形态的颗粒，，，，，，外貌涂层有一层碳链和疏水基团。。。。。。。样品在经由样品预处置惩罚后，，，，，，通过进样器注入色谱柱中，，，，，，在柱内填充的颗粒外貌爆发反相作用，，，，，，非极性物质向柱内靠拢，，，，，，极性物质则倾轧柱内颗粒而向外逸散。。。。。。。通过改变流动相的极性和离子强度等条件，，，，，，可以实现看待测物的选择性疏散和纯化。。。。。。。

　　C18反相色谱柱其操作办法：

　　1、准备事情：

　　检查仪器装备是否正常运行，，，，，，确保柱子处于优异状态。。。。。。。准备好所需的溶剂和移动相。。。。。。。

　　新柱在使用前需举行处置惩罚。。。。。。。配制好65%的乙腈/水溶液，，，，，，将色谱柱准确毗连在色谱仪上，，，，，，出口放空（注重出口端不可连上检测器，，，，，，以免污染），，，，，，以低流速0.1ml/min~0.5ml/min举行冲洗，，，，，，等望见柱子出口有液体流出后，，，，，，过20分钟再接上检测器，，，，，，以循序渐进的要领将流速调至1.0ml/min，，，，，，继续冲洗2~8小时。。。。。。。

　　2、样品制备：

　　将待测样品消融于适当的溶剂中，，，，，，并举行须要的预处置惩罚，，，，，，如过滤、离心等。。。。。。。

　　3、柱子装填：

　　将C18反相柱装入色谱柱架中，，，，，，毗连好进样系统和检测器。。。。。。。

　　4、初始条件设置：

　　设置移动相组成和流速，，，，，，一样平常接纳梯度洗脱要领，，，，，，即最先时使用较弱的极性溶剂，，，，，，逐渐改变为较强的极性溶剂。。。。。。。

　　5、进样：

　　将样品通过进样系统注入柱中，，，，，，注重坚持稳固的进样流速。。。。。。。

　　6、色谱疏散：

　　最先举行色谱疏散，，，，，，凭证需求调解流速和梯度条件，，，，，，使差别组分获得有用疏散。。。。。。。

　　7、数据收罗息争析：

　　使用检测器对柱出口的化合物举行检测和纪录，，，，，，获取响应的色谱图。。。。。。。

　　8、效果剖析：

　　凭证色谱图举行效果剖析，，，，，，确定目的化合物的峰位置、峰高、峰面积等参数。。。。。。。

　　9、色谱柱洗濯：

　　若是样品剖析中只用到一样平常的乙腈、甲醇和水的流动相，，，，，，做完样品后可直接用55%~65%乙腈/水或55%~65%甲醇/水冲洗色谱柱40~80分钟，，，，，，然后以纯甲醇或乙腈冲洗30分钟生涯。。。。。。。

　　若是样品剖析中流动相里含有缓冲液或酸或离子对试剂，，，，，，做完样品后需先用5%的甲醇/水或5%的乙腈/水冲洗一小时以上（若是色谱柱更长，，，，，，则还需增添适其时间），，，，，，然后用55%甲醇/~水65%/水冲洗色谱柱30~60分钟，，，，，，最后用甲醇或乙腈以1ml/min流速冲洗30分钟。。。。。。。

　　10、色谱柱再生：

　　当色谱柱使用较长时间后泛起柱压力升高、疏散度欠好、柱效降低、峰形欠好等情形时，，，，，，可举行再生。。。。。。。先用5%甲醇/水或5%乙腈/水反向冲洗60分钟以上，，，，，，然后用*以1ml/min流速冲洗30分钟以上，，，，，，再用65%甲醇/水或65%乙腈/水以1ml/min流速冲洗60分钟，，，，，，最后用纯甲醇或乙腈冲洗30分钟生涯即可。。。。。。。